PCR检测主要是检测什么,PCR技术的优势有哪些啊?
答:聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=10-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中最小检出率为3个细菌。
简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。
rtpcr原理及应用?
RT -PCR
用于检测基因表达水平的反应
RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应。原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
核酸检测是怎么检测?
核酸检测结果是新型冠状病毒肺炎患者确诊的重要依据。所有的新型冠状病毒核酸样本均在盟市及以上疾控中心进行检测。
由定点医院采集样本后,按照生物安全要求进行三层包装,由专人专车送到疾控中心实验室,实验室人员做好样本登记。由此进入到了核酸检测的第一步。实验室人员将会把样本暂时存放于样本库。随后就需要按照生物安全三级防护穿戴好个人防护装备。首先是进行消毒,戴上双层手套,穿上一次性连体防护服,佩戴好N95医用口罩、护目镜、帽子、鞋套,然后拉上防护服的拉链,检查防护服是否穿好。所有检查完后方可进入负压实验室。(负压实验室,就是通过特殊通风装置,使实验室内空气由清洁区向污染区流动,使实验室内的压力低于室外压力。负压实验室里面比较闷,噪声较大,实验时需要精力高度集中,一次检测下来整个人都筋疲力尽。)
待实验室环境准备好后,将样本转运到加强型二级生物安全实验室传递窗中。实验人员进入核心实验区域,从冰箱取出核酸提取试剂与冠状病毒核酸检测试剂解冻,然后进入核酸提取区域进行样本核酸提取,将提取好的核酸样本通过传递仓进入试剂配制区域,然后配制PCR反应液并分装于八连管,通过进入核酸扩增区域,将八连管放入实时荧光定量PCR仪器进行核酸扩增反应。待反应结束后,按照试剂说明书判断检测结果,并按照规程上报检测结果。
每做一批实验检测,从样本接收登记、实验环境准备、个人防护装备、到实验检测及废弃物无害化处理,整个过程大概需要6-7个小时。
医务人员在采样及检测过程中极易感染病毒,所以一定要做好防护。在此次疫情中,广大医务人员逆行而上,就是为了保障人民的健康,希望大家为我们的医务人员点赞?
rtpcr检测什么?
检测基因的
RTPCR,反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription )和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。
首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。
什么是PT?
应用逆转录PCR(PT-PCR)技术RT-PCR。RT-PCR 为反转录RCR和实时PCR的共同缩写。是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
还没有评论,来说两句吧...