ppvpp(ppv会计是什么意思)

ppvpp，ppv会计是什么意思？

ppv会计意思是采购价格变化。英文全称是PURCHASE PRICE VARIANCE。 是指实际采购价格（Actual Price Paid）与标准成本（Standard Cost）间的差异。 PPV使用在软件上的意思是在使用PPLive，PPStrem的点播功能时产生的，产生的文件PFSVODDATA.ppv，有1G大，可以删除的,文件是用于让你缓冲时间更短，打开视频速度更快，不过文件比较大，一般都是在最后的盘里生成. 。如果在使用PPLive只看直播节目就不会产生这个文件。

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WWe2022大型赛事指得是PPV赛，有一月份的皇家大战，2密室牢笼赛。接者到最最重要的摔跤狂热大赛。合约阶梯包大赛，极限规则大赛，又到TC乚(梯子，椅子，桌子)大赛，又到sD的重头戏夏日狂潮大赛。一个月后强者生存大赛又来临，一年里以皇家大战，摔跤狂热，夏日狂潮，强者生存这四个ppⅤ赛事是最重要的大型赛事。

如何利用诊断检测来优化猪二型圆环病毒免疫接种？

猪圆环病毒(P orcine circ ovirus,PCV)为圆环病毒科圆环病毒属的成员,属单股环状D NA 病毒。该病毒无囊膜,具20面体,平均直径17nm,不具备血凝活性,可抵抗p H 值3的酸性环境,能在vero 细胞中生长繁殖,但不产生细胞病变。根据PC V 的致病性、抗原性或核苷酸序列,可将PCV 分为两个型,即PC V -1和PCV -2。P CV -1无致病性,广泛存在于猪群中[1-2]。

具致病性的P CV -2能引起多种疾病综合症,如能引起仔猪断奶后多系统衰竭综合症(P MW S)、猪皮炎和肾炎综合症、猪增生性坏死性间质性肺炎等,能与弓形体、附红细胞体混合感染,同时能加剧诸如猪繁殖与呼吸综合症、猪细小病毒病等的发生和流行[1]

。P CV -2广泛存在于世界各地,对有些国家和地区养猪业造成的危害特别严重。

目前,诊断该病的方法虽多,但速度较慢,而P CR 技术可以在短时间内诊断出疾病。笔者根据GenBank 中的PC V -2序列设计出特异性引物,建立猪圆环病毒2型地方分离株的PCR 诊断方法,以期为快速诊断猪圆环病毒病提供参考。1 材料与方法

1.1 毒株 猪圆环病毒2型(P CV -2)阳性病料由河南科技学院兽医院提供(经ELI SA 检测确认为阳性);猪繁殖与呼吸综合症病毒(P RRS V)、猪瘟病毒(HCV)、猪细小病毒(PP V)、猪流感病毒(SI V)均由河南科技学院预防兽医学实验室提供。1.2 工具酶和主要试剂 Taq D NA 聚合酶、dN TPs 、La dde r Mar ke r 、蛋白酶K 均购自T a Ka Ra 公司,SDS 、饱和酚、氯仿、无水乙醇均购自华美生物工程有限公司。

1.3 引物设计与合成 参照Ge nBa nk 上发表的20株PCV -2

的核苷酸序列,通过引物设计序列软件P ri mier 5.0设计1对引物,上游引物为:5c -G GAG TCTG GTG ACCG TTGC -3c ;下游引物

为:5c -C TTCCTCCGTG GA TTG TTC T -3c ,引物由上海生物工程有限公司合成。

1.4 PC V -2DNA 模板的制备[3]

取部分病料0.5~2.0g,研磨并用Hank .s 液(p H 值7.2~7.4)稀释成1B 3乳剂,反复冻融3次以上后,8000r/min 10min,取上清液于-20e 保存备用。取病料上清液500L l,加入10%SD S 50L l,蛋白酶K 20L l,混匀后55e 水浴1h 。加800L l 苯酚混匀,12000r/min 5min 。取上清液,加苯酚、氯仿各300L l,混匀,12000r/min 5min 。取上清液,加等量氯仿,12000r/min 5min 。小心取上清液,加2倍无水乙醇及1/10体积的Na Ac,混匀后,置-20e 沉淀30min 以上,12000r/min 15min 。弃去上清液,然后加入200L l 75%酒精洗涤数次,37e 烘干。加入30L l dd H 2O 溶解,作为PCR 反应的模板或-20e 保存备用。

1.5 PCR 反应及条件的优化 P CR 反应的基本步骤按照5分子克隆实验指南6[4]

进行,对反应体系中的dN TP 、酶、引物的浓度进行了优化。在25.00L l 体系中,10@Buffer 2.50L l,dN TP 2.00L l,模板1.00L l,D NA 聚合酶0.15L l,引物各1.00L l,d 2H 2O 17.35L l 。P CR 反应程序:94e 2min;94e 1min,50e 1min,72e 1min,30个循环,72e 10min;4e 保存。1.6 电泳检测 在1%琼脂糖板(在50e 左右时,加入3L l 染料G OOD VIEW)上加入D L2000及PCR 产物,电压为80V 。电泳结束后于紫外灯下观察、拍照。1.7 PC R 的特异性实验 将上述提取的P CV -2D NA 和用Tri zo l 试剂盒提取PR RSV 、HC V 、SI V 的c DN A 以及PP V 的D NA 进行PCR 扩增,引物为上述所设计的P CV -2D NA 的特异性引物,鉴定该方法的特异性。

1.8 PCR 的敏感性实验 将所提取的D NA 用紫外分光光度计在260nm 处进行快速测定,核酸含量约为50ng,然后用灭菌双蒸水进行10、20、40、80、160倍的稀释,用上述实验确

安徽农业科学,Journal of Anh ui Agri.Sci.2008,36(16):6678-6679,6700 责任编辑 孙红忠 责任校对 卢瑶

定的PCR 最佳反应条件进行PCR 扩增。以出现阳性反应条带的模板用量为最高稀释倍数,推算可检出最低病毒含量。2 结果与分析

2.1 PCR 条件的优化及电泳结果 通过对PCR 扩增条件的优化,得出各物质的最佳使用浓度:dN TP 的终浓度为220pmol/ml,Taq 酶的终浓度为0.1U/L l,引物的终浓度为20pmol/L l 。

用优化的条件对从阳性病料中提取的D NA 进行PCR 扩增。将PCR 反应后的产物在紫外灯下观察,结果见图1,在494bp 处出现1条特异性条带,



与预期大小相符合。

注:M 为DL2000;1为PCR 产物。Note:M.D L2000;1.Product of PCR.

图1 PCR 检测结果Fig.1 T he results o f PC R detectio n

2.2 PC R 检测PC V -2的特异性 应用所建立的方法同时

检测PC V -2、PR RSV 、HC V 、SI V 、PP V,其中P CV -2检测为阳性,PRR SV 、HC V 、SIV 、PP V 检测均为阴性,未出现交叉反应,证明该方法具有良好的特异性,结果见图2



。

注:M 为DL2000;1为PCV -2;2为PRRSV;3为HCV;4为SIV;5为PP V 。

Note:M.D L2000;1.PCV -2;2.PRRSV;3.HCV;4.SIV;5.PPV.

图2 特异性检测结果

Fig .2 The res ults o f s pecific d etection by PCR

2.3 PC R 检测PCV -2的敏感性 将提取的D NA 稀释后用上述PCR 反应条件进行扩增,结果见图3,表明该PCR 方法可检出1.25ng 的模板D N A,具备较高的敏感性。3 小结与讨论

3.1 猪圆环病毒防治 自1991年加拿大首次报道P MWS 以来,许多国家相继报道此病,并开展了广泛深入的研究,证实P MW S 的发生与PCV -2感染密切相关[5-6]

。PC V -2感染可导致猪发生先天性震颤及猪皮炎肾病综合症[1,3]。鉴于国内养猪规模的不断扩大及与国际养猪业交流日益加强,很难保



证猪群中没有PC V -2感染及其相关疾病的传入。因此,正确

诊断是预防猪圆环病毒病的关键。

注:M 为DL2000;1为50.000ng DNA;2为5.000ng D NA;3为2.500

ng DNA;4为1.250ng DNA;5为0.625ng DN A;6为0.375ng D NA.

Note:M.DL2000;1.50.000ng DN A;2.5.000ng D NA;3. 2.500ng

D NA;4.1.250ng DNA;5.0.625ng D NA;6.0.375ng DNA.

图3 敏感性检测结果

Fig.3 The res ults o f s ensitiv ity detectio n by PCR

到目前为止,虽然众多国外科研工作者对PCV 及其所导致的各种疾病进行了大量的研究,并取得了不小的进展,但是,国内对P CV 研究还处于起始阶段[10]。迄今为止,该病的

疫苗正处于实验阶段,市场上还没有商品化疫苗和特效药物防治该病,并且该病有时呈亚临床感染[7]。

由于该病原具有特殊性(动物携带病毒但不一定会发病),它主要侵害动物的免疫系统,导致其机体的免疫力下降,进而造成许多病原的继发感染。目前主要采取的措施是加强饲养管理,定期消毒,严防P PV 、P RRS V 等引起疾病,降低饲养密度,坚持自繁自养,全进全出,引种猪时应慎重,加强早期疑似感染猪的诊断与淘汰[8]。除此之外,应建立一种快速、特异、简便的检测方法,为控制PC V 所致疾病的发生与流行提供技术保障。

3.2 猪圆环病毒的实验室诊断 实验室诊断PC V 的方法有很多种。酶联免疫吸附实验(ELISA)具有重复性、特异性和敏感性较好的特点,适合于大规模的PC V -2抗体的快速诊断,同时可用于进出口检验检疫的初筛,但往往存在假阳性偏高的问题[9]。通常用来诊断PCV -2的ELISA 方法包括间接ELISA 、竞争E LI SA 和抗原捕获ELISA 等。间接免疫荧光

实验(I FA)可用于猪圆环病毒感染的血清学普查[9],宜于检测细胞培养物中的P CV 。原位核酸杂交(IS H )具有群特异

性,灵敏度较高,可以精确定位PCV 在组织器官及其细胞中的部位,可用于检测临床病料和病理分析,但不能区分PCV -1和PCV -2。免疫组化实验(I HC)适合于病毒抗原在组织培养和机体细胞内生长定位的观察。来源于不同地区的PCV -2分离株,其基因组序列有差异,这种差异对PC V -2的诊断和研究有重要意义。已有学者利用此差异建立了P CV -RF LP 方

法,以此来诊断PCV 感染[10]

。

3.3 PC R 检测PCV -2 通常情况下,病毒病的确诊均需进行病毒分离。但由于PC V 的病毒粒子很小(只有17nm),在细胞上不产生细胞病变,且需将P CV 盲传多代才能使病毒有效增殖[2]。因此,病毒分离费力、耗时,不适于此病的快速诊断。国外已有多种市售诊断试剂盒,如ELISA 、间接免疫荧光

华为pp视频会员怎么取消？

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ppv管胶水清洗方法？

1、用纸巾或抹布沾一些酒精(最好用工业酒精，要不用医用的也凑合)擦拭，再蹭几下就干净了。

2、用丙酮。

方法同上。

用量少而且彻底，最棒的是它能极迅速极容易地去掉这些残留的胶质，比洒精更好使。

3、用洗甲水。

用法也跟酒精丙酮一样。

效果也很不错。洗甲水不要求质量，好的或一般的都行，只要能洗掉指甲油的通通可以。

4、用护手霜。

先把表面的印制品撕掉，然后再把护手霜挤一些在上面，慢慢地用大拇指搓，搓一会儿就能把粘的残胶都搓下来。

就是慢一点儿。

护手霜属于油脂类物质，其性质与胶类不相容。除胶就是用它这个特性。

5、用香蕉水。

就是用来清除油漆的一种工业用剂，也很容易就买到的(卖油漆的地方就有卖的)